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DH5α感受态细胞图片
产品货号:
KD0320
中文名称:
DH5α感受态细胞
英文名称:
DH5α Chemically Competent Cell
产品规格:
20×100μL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
保存条件(保质期):-80℃(6个月)
产品规格:100μL/支
基因型:
F-φ80 lacZΔM15Δ(lacZYA-argF) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+)sup E44λ-thi-1 gyrA96 relA1 phoA
产品说明:
DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶(endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。
操作方法:
1.DH5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
注意:所使用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的1/10,100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
注意事项:
1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
相关搜索:DH5α感受态细胞DH5α Chemically Competent Cell
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